在miRNA研究领域，验证miRNA与基因靶向关系是一个重要的环节。miRNA通过其种子序列（5’端第2-8个碱基）靶向结合mRNA的3’UTR区，进而诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或者抑制mRNA的翻译。因此，研究人员可以设计实验，将目的基因的3'UTR区域（或其结合位点下游500bp）插入荧光素酶报告基因载体，例如PGL3-CMV-LUC-MCS，并与miRNAmimics共同转染至目标细胞中。添加底物后，可以通过检测荧光素酶活性的变化来评估miRNA与靶基因3'UTR区的相互作用。如果荧光素酶活性降低，则说明miRNA与靶基因3'UTR确实存在相互作用。

双荧光素酶报告基因检测的工作原理主要包括以下步骤：首先，利用生物信息学分析软件（如TargetScan、StarBase和miRanda等）对特定靶基因的3'-UTR区序列进行miRNA结合位点的预测。其次，将预测出的靶基因3'-UTR序列插入包含萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）的载体中。当miRNA与质粒中的插入序列结合后，miRNA将抑制萤火虫荧光素酶的翻译，导致荧光值降低。这些步骤为验证miRNA与靶基因间的相互作用提供了实验基础。

接着，实验步骤还包括在合适的细胞系中进行优化的转染实验。在对HEK293或其他目的细胞进行转染时，需确认细胞的转染效率达到40%以上，这样才能保证实验的成功。操作流程包括使用胰酶消化细胞并将其接种于24孔培养板中，经过一夜的培养，当细胞覆盖率达到70%时进行转染。转染后，通常在48小时收集细胞样品用于后续实验。

在样品处理时，细胞需用PBS洗涤并加入1×PLB进行裂解。随后，进行荧光素酶检测时，根据报告基因检测试剂盒的说明书操作，并使用酶标仪读取荧光素酶活性。常规的检测分组包括对照质粒与miRNA的不同组合，通过实验可望提供清晰的结果，以此加速基础研究与药物筛选的进展。

尊龙凯时致力于提供优质的双荧光素酶报告基因检测服务，帮助科研人员深入探索miRNA的功能以及其在基因调控网络中的作用，为生物医学研究提供强有力的支持。

为满足不同实验需求，以下是尊龙凯时提供的相关产品清单，包括双荧光素酶报告基因检测试剂盒及转染试剂。所有产品均经过严格检测，以确保实验的可靠性和有效性。