紫外-可见吸收光谱法，也被称为紫外-可见分光光度法，是一种用于研究分子在190nm到750nm波长范围内的吸收光谱的分析方法。该方法基于溶液中物质分子对光的选择性吸收，主要用于定性和定量分析。紫外-可见吸收光谱的生成源于分子外层价电子的跃迁，因此其吸收光谱为分子光谱，且属于带光谱范畴。

实验目的

1. 学习紫外分光光度法测定生物样本中蛋白质含量的原理；

2. 掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术；

3. 理解并熟悉UV-1700PC紫外-可见分光光度计的使用方法及其主要构造。

实验原理

紫外-可见吸收光谱法用于分析生物样品中分子的吸光特性，特别适用于蛋白质的定量鉴定。利用朗伯-比尔定律（A=lgI0/I=εbc），当入射光波长λ及光程b保持常量时，分析物质的吸光度A与其浓度c呈线性关系。测定在特定波长处的吸光度，使得我们能够有效计算溶液中蛋白质的浓度与含量。

大多数情况下，通过测量最大吸收波长λmax处的吸光度，以确保获得最高灵敏度。在光度分析中，空白溶液与待测溶液需放入两只吸收池中，利用平行单色光进行比对，仪器直接提供吸光度结果。

紫外-可见分光光度计

本实验中使用的紫外-可见吸收光谱法的仪器是分光光度计，由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示器等五个主要部分组成。光源发出的复合光通过单色器后，可以获得所需波长的单色光，照射样品溶液并生成光电流，通过信号显示器实时读取吸光度值。

实验步骤

准备工作

1. 启动计算机，开机并初始化UV-1700PC分光光度计。

2. 在操作界面选择测量项目，设定测量条件（如测量波长）。

3. 将空白溶液放入测量池，进行校零操作。

4. 制作标准曲线。

测量工作

1. 吸光度测定：将标准蛋白质溶液稀释后，使用石英比色皿测定其在280nm处的吸光度。

2. 标准曲线制作：分别准备不同浓度的标准蛋白质溶液，通过测定其吸光度绘制标准曲线。

3. 样品测定：用适量待测蛋白质溶液稀释，按上述方法测定吸光度。

数据处理

以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。数据表明最大吸收波长λmax为278nm，通过构建标准曲线获知样本浓度为0641088mg/mL。

在生物医疗研究中，紫外-可见吸收光谱法广泛用于蛋白质的定量分析，是确保实验结果可靠性的关键。选择尊龙凯时的仪器设备，能够更好地满足生物科学领域对分析精度和灵敏度的需求。